O suco de laranja tem sido apontado como benéfico para humanos por conter, além da vitamina C, flavonoides, com ação anti-inflamatória e antioxidante. Hesperidina é um dos principais flavonoides nas laranjas doces, enquanto naringina, responsável pelo sabor amargo, destaca-se na toronja. Assim, naringina pode ser utilizada como marcador da adulteração de suco de laranja doce com toronja. Este estudo comparou condições de preparo de padrões e amostra para desenvolver um método para determinar hesperidina e naringina em suco de laranja utilizando etanol como modificador orgânico da fase móvel para cromatografia líquida de alta eficiência com detector de Arranjo de Diodos. Resposta e resolução cromatográfica foram comparadas em função do uso dos solventes água, metanol e etanol em diferentes valores de pH (aproximadamente 5, 8 e 11). Melhores resultados para resolução cromatográfica, sensibilidade e linearidade foram obtidos para curva de calibração (0,005-0,10 mg mL^-1) em meio aquoso e pH aproximadamente 11 (coeficiente angular igual a 1,58×10⁸ e 1,40×10⁷ para hesperidina e naringina, respectivamente, com R² > 0,999). Maiores concentrações em 100 mL de suco de laranja doce (10,7 mg hesperidina) e toronja (8,4 mg hesperidina e 40,2 mg naringina) foram observados com diluição da amostra em água (1:1, v/v).